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ELISA試劑盒的組成和操作步驟
點擊次數:1540 發布時間:2017-03-14

      今天天氣晴朗,一掃昨日陰雨天氣,暖暖的太陽讓這傳自西方的白se情人節更顯溫馨,上海恒遠生物科技有限公司給大家帶來美好的節日祝福。下面我們言歸正題,跟大家介紹ELISA試劑盒組份和操作步驟。ELISA中有三個必要的試劑:免疫吸附劑、結合物和酶的底物等。

完整的ELISA試劑盒包含以下各組分
(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑)
(2)酶標記的抗原或抗體(結合物);
(3)酶的底物;
(4)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參考標準品和控制血清(定量測定中);
(5)結合物及標本的稀釋液;
(6)洗滌液
(7)酶反應終止液。

ELISA試劑盒操作步驟
1. 加標準品:在酶標包被板上設標準品孔,依次加入不同濃度的標準品50ul(建議每個濃度做2個平行孔)
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品40μl,

然后再加樣品親和素10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:除空白孔外每孔加入酶標試劑50μl。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

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