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免疫組化問題,上海恒遠一一為您解答
點擊次數:395 發布時間:2018-07-23

    時間沒有等我,是你忘了帶我走 ,我左手過目不忘的的螢火,右手里是十年一個漫長的打坐。轉眼間暑假已經過去一半, 免疫組化問題,上海恒遠一一為您解答

1、染色過強

原因及相關解決方法

a 抗體濃度過高或孵育時間過長 降低抗體滴度、抗體孵育時間:室溫1小時或4度過夜

b 孵育溫度過高超過37度 一般在室溫20-28度

c DAB顯色時間過長或濃度過高 顯色時間不超過5-12分鐘,以顯微鏡下觀察為準 

 

2、非特異性背景染色

原因及相關解決方法

a 操作過程中沖洗不充分: 每步沖洗3次每次5分鐘

b 組織中含過氧化物酶未阻斷 :可再配置新鮮3%H2O2封閉孵育時間延長

c 組織中含內原性生物素:正常非免疫動物血清再封閉

d 血清蛋白封閉不充分:延長血清蛋白封閉時間

 

3、染色弱

原因及相關解決方法 

a 抗體濃度過低、孵育時間過短:提高抗體濃度、孵育時間不能少 于60分鐘

b 試劑超過有效使用時間: 應更換試劑

c 操作中添加試劑時緩沖液未瀝干 :每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液

使試劑稀釋 (應防止切片干燥)

d 室溫太低 :低于15度要改放在37度孵育箱孵育30-60分鐘或4 度冰箱過夜

e 蛋白封閉過度:封閉不要超過12分鐘

 

4、染色陰性

原因及相關解決方法 

a 操作步驟錯誤:應重試設陽性對照

b 組織中無抗原:設陽性對照以驗證試驗結果

c 一抗與二抗種屬連接錯誤:仔細確定一抗二抗種屬無誤

     上海恒遠是一家專業從事“產品研發生產、市場銷售、技術服務”為一體的高科技生物技術公司,公司生產的產品質量有保證,含量高,能夠給實驗帶來準確的結果。如有需要可咨詢我司銷售人員,我們將竭誠為您服務。

 

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