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細胞培養中如何消除組織培養的污染
點擊次數:264 發布時間:2019-01-02

      當重要的培養污染時,研究者可能試圖消除或控制污染。首先,確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母,把污染細胞與其它細胞系隔離開,用實驗室消毒劑消毒培養器皿和超凈臺,檢查HEPA過濾器。 高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性,因而,做劑量反應實驗確定抗生素和抗霉菌素產生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是我司推薦的確定毒性水平和消除培養污染的實驗步驟: 

 
1. 在無抗生素的培養基中消化、計數和稀釋細胞,稀釋到常規細胞傳代的濃度。 
     2. 分散細胞懸液到多孔培養板中,或幾個小培養瓶中。在一個濃度梯度范圍內,把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如,兩性霉素B推薦下列濃度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。 
 
3. 每天觀測細胞毒性指標,如脫落,出現空泡,匯合度下降和變圓。  

4. 確定抗生素毒性水平后,使用低于毒性濃度2~3倍濃度的抗生素的培養液培養細胞2~3代。 

    5. 在無抗生素的培養基中培養細胞一代。 

    6. 重復步驟4。 

    7. 在無抗生素的培養基中培養4~6代,確定污染是否以已被消除。  

      我司分析細胞培養細胞培養技術也叫細胞克隆技術,在生物學中的正規名詞為細胞培養技術。不論對于整個生物工程技術,還是其中之一的生物克隆技術來說,細胞培養都是一個必不可少的過程。

 

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