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植物細胞組織培養
點擊次數:246 發布時間:2019-01-10

     實驗目的

    植物細胞和組織培養的技術性強,要求無菌操作,通過本實驗可初步掌握常規的組織培養技術,加深對無菌操作的了解。

    二.實驗原理

    植物的性:植物體的任何一個細胞都具有生長分化成為一個完整植株的能力,稱為植物的性。

    植物組織培養就是利用植物的性進行離體無菌植物培養的一門技術。植物組織培養按其原始意義,就是指愈傷組織培養。但發展至今,其范圍日益擴大,已包括植物和它的離體器官、組織、細胞和原生質體的離體無菌培養。因此,擁有幾種不同水平的培養技術,即整體的、器官的、組織的、細胞的和原生質的培養技術。

    本實驗選擇豌豆為材料,豌豆(Pisumsativum)屬豆科植物,是糧食、飼料和重要的蔬菜作物,也是遺傳學家和植物生理學家感興趣和樂于采用的實驗植物,豌豆的根、莖、子葉、下胚軸、上胚軸、花芽等外植體,皆可形成愈傷組織,其中莖尖、幼胚、幼葉等器官可成功的再生成植株。莖尖培養可包括小至十幾微米的莖尖分生組織(生長點)和大至幾十毫米的莖尖或更大的芽培養。在實踐應用上,常采用生長點的培養使患病植物去病毒,以達到挽救優良品種,提高產量和質量之目的。

    三.實驗材料

    儀器設備:1.酒精燈、三角燒瓶,培養皿;2.鑷子、剪刀、剖針;3.雙筒解剖顯微鏡;4.光照培養箱或溫室;

    材料煙草無菌苗、豌豆幼苗。

    試劑

    (1)MS培養基,植物激素:NAA、6-BA等;

    (2)飽和漂液(次氯酸鈉);

    (3)70%酒精、100%酒精、酒精棉球;

    (4)無菌水

    四.實驗步驟

    豌豆苗的莖尖培養

    ⑴取發芽6天的豌豆幼苗10株,簡取1厘米左右的莖尖,浸入70%的酒精中1分鐘,再浸入飽和次氯酸鈉溶液中消毒15分鐘,(此步以后要求無菌)用無菌水中沖洗5次,在滅菌的濾紙上吸干水分,放入滅菌的培養皿中。

    ⑵在雙目解剖鏡下,用滅菌的解剖針剝去幼葉露出生長錐,用滅菌的解剖針挑取帶著兩至三個葉原基的生長錐。

    ⑶將挑好的莖尖移到MS+10.7μmol/L萘乙酸(NAA)+4.4μmol/L6-芐基腺嘌呤(6-BA)的培養基上誘導愈傷組織形成,用封口膜將培養皿封好。

    (4)在恒溫培養箱中,26℃下,培養六周,形成愈傷組織,經繼代后,可用于生根培養

 

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